3730/3730xl基因分析仪如何做光谱校正（Spectral Calibration）？

DNA会被不同的荧光素标记，不同的荧光素组合称为染料组（Dye Set）。从下图可以看到，四（或五）色荧光检测系统的本质是检测四（或五）种荧光素在其中心发射波长处的信号。由于每一种荧光素的发射光谱不是锐线光谱，而是一种有一定宽度分布的光谱带。所以一种纯荧光除在它自己光谱的中心波长处能采集到信号N1外，在其他荧光信号光谱的中心波长处亦能检测到信号而产生信号重叠。为了校准信号重叠，需知道一种荧光信号在其他荧光信号处产生的重叠系数。所以，我们用不同长度的DNA片段分别标记上不同的荧光素来计算这些系数。最后得到一个4 x 4（或5 x 5）的数据矩阵（Matrix）。

光谱校正，又称为Matrix校正。
二、何时做光谱校正?

• • 使用了新的荧光染料 。
  • 激光系统或CCD在工程师调节或更换后 。
  • 实验结果中出现不同颜色的荧光干扰（有拔起或下压峰） 。
  • 参数的改变（荧光类型Dye Set，毛细管类型50cm/36cm） 。

      注：仅仅更换同种类型的毛细管，无需光谱校正

注：

其他实验试剂请联系试剂厂商了解相应Dye Set及相应光谱校正试剂

 四、样品准备

• • 照试剂盒说明书，用Hi-Di甲酰氨混合校正标准品 。
  • 震荡离心 。
  • 95ºC变性5分钟后立即冰浴2分钟 。
  • 震荡离心 。

如下图D-1

• • 在96或384孔板中分装样品（96孔板10μl/孔连续加样，384孔板5μl/孔隔行加样） 。

如下图D-2

• • 使用橡胶垫装配样品板，装配后橡胶垫必须平整。样品板上的孔与橡胶垫上的孔要对齐（如使用热封膜，请参考相关封膜机手册） 。

如下图D-3

• • 简单离心，比如<1500g，5秒 。
  • 确认所有孔的样品都在底部 。

如下图D-4

• • 按下图组装上样组件。

注意：

1. 组装灰色橡胶垫和样品板的时候，注意样品板上的孔与橡胶垫上的孔要对齐，不要有拱起或压扁。
2. 组装灰色橡胶垫和白色固定器的时候，注意橡胶垫于固定器上进样孔要对齐，否则会损坏毛细管。